多重PCR快速检测三种食源性致病菌的研究

来源 :第五届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运作服务研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong539
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  大肠杆菌、沙门氏菌和副溶血弧菌是常见的食源性致病菌,常引起食物中毒,并造成严重的经济损失.本研究根据大肠杆菌的16s-23s rRNA保守序列基因、沙门氏菌的侵袭蛋白A基因invA以及副溶血弧菌的属特异性基因t1分别设计三对特异性引物,建立多重PCR检测方法,同时实现对三种食源性致病菌的快速检测,并对其特异性、灵敏性进行考察.建立的三重PCR反应体系为:大肠杆菌引物浓度0.5 μ mol/L,沙门氏菌引物浓度0.3 u mol/L,副溶血弧菌引物浓度0.4 μ mol/L,Mg2+浓度1.5mmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶2U.PCR反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性50s,55℃退火50s,72℃延伸50s,进行30个循环;最后72℃延伸10min.该多重PCR方法特异性强,不会扩增非目的菌的基因;其对大肠杆菌、副溶血弧菌、沙门氏菌的检出限分别为5.0cfu/mL、5.0 cfu/mL与5.0×102cfu/mL,三种菌同时检出的检测限为5.0×102 cfu/mL.
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