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基于已报道的甘蔗黄叶病毒(ScYLV)cp基因和高粱花叶病毒(Sorghum mosaicvirus,SrMV)NSP基因序列设计特异性引物，建立了针对这两种病毒的荧光定量PCR检测方法。在此基础之上，利用扩增产物TM值的不同，建立了可区分ScYLV与SrMV的多重SYBRGreen-I实时荧光定量PCR方法，两种病毒扩增产物的TM值分别为82.8-83.8℃和85.6-86.6℃。检测数据显示：SrMV和ScYLV均有各自的特异性的峰值出现，而健康植株无特异性峰值；在单独检测中的检出水平可分别达到500copy/μL和250copy/μL；两种病毒TM值的批内变异系数分别为0．03％和0．02％，批间变异系数分别为2．06％和3．12％。综上所述，所建立的多重SYBRGreen-I实时荧光定量PCR方法在对以上两种病毒的检测中具有较好的特异性、敏感性和稳定性。