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目的：丙型肝炎病毒(HCV)是导致慢性肝炎的主要因素之一，具有一条正链ssRNA，编码一个大的多聚蛋白。产生HCV病毒粒子的细胞培养系统已经开发出来，目前主要用来研究HCV的生活史和抗HCV药物。然而，在HCV病毒感染或复制系统中，HCV病毒滴度的检测只能依靠RT-PCR方法或免疫荧光法，这些方法在高通量药物筛选中相当麻烦。
方法：为了克服以上问题，我们构建了一个双顺反子报告基因质粒，pHIG3NCR，其包含CMV启动子调控下的HCV的5IRES-Core的反向序列，后面以EMCV的IRES-EGFP的反向序列，最后连接HCV的3NCR。利用此报告质粒和pIRESDsRed-NS5B质粒共转染Huh7细胞,NS5B聚合酶能够以报告质粒产生的反向mRNA为模版合成出相应的正向序列，因而可以产生GFP绿色荧光，其强弱代表了NS5B活性。利用相应的已知NS5B抑制剂作为阳性药物，检测此报告系统的检测灵敏度。
结果：将pHIG3NCR和pIRESDsRed-NS5B共转染Huh7细胞后，通过荧光显微镜观察，能够看到红色荧光和绿色荧光，证明有GFP和DsRed的表达。同时，利用NS5B和Core的特异抗体，通过细胞免疫组化方法检测，都能检测到NS5B和Core蛋白的表达。通过RT-PCR方法能够检测到NS5B和Core的RNA表达。利用NS5B抑制剂R1626检测，与对照组相比最高达到68.1％的抑制率，并呈剂量依赖性。这些结果证明构建的NS5B抑制剂细胞筛选模型能够应用于抗HCV药物的高通量筛选，并可以支持在活体检测。
结论：本实验首次构建了适于高通量筛选的抗HCV药物的细胞模型。
方法：为了克服以上问题，我们构建了一个双顺反子报告基因质粒，pHIG3NCR，其包含CMV启动子调控下的HCV的5IRES-Core的反向序列，后面以EMCV的IRES-EGFP的反向序列，最后连接HCV的3NCR。利用此报告质粒和pIRESDsRed-NS5B质粒共转染Huh7细胞,NS5B聚合酶能够以报告质粒产生的反向mRNA为模版合成出相应的正向序列，因而可以产生GFP绿色荧光，其强弱代表了NS5B活性。利用相应的已知NS5B抑制剂作为阳性药物，检测此报告系统的检测灵敏度。
结果：将pHIG3NCR和pIRESDsRed-NS5B共转染Huh7细胞后，通过荧光显微镜观察，能够看到红色荧光和绿色荧光，证明有GFP和DsRed的表达。同时，利用NS5B和Core的特异抗体，通过细胞免疫组化方法检测，都能检测到NS5B和Core蛋白的表达。通过RT-PCR方法能够检测到NS5B和Core的RNA表达。利用NS5B抑制剂R1626检测，与对照组相比最高达到68.1％的抑制率，并呈剂量依赖性。这些结果证明构建的NS5B抑制剂细胞筛选模型能够应用于抗HCV药物的高通量筛选，并可以支持在活体检测。
结论：本实验首次构建了适于高通量筛选的抗HCV药物的细胞模型。