【摘 要】
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目的 建立舒伯特气单胞菌的TaqMan-MGB 实时荧光定量PCR 检测方法,用于水产养殖过程中病害早期舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)的快速检测.方法 根据已经发表的舒伯特气单胞菌的rpoD 基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB 探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR 方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价.用建
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380
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目的 建立舒伯特气单胞菌的TaqMan-MGB 实时荧光定量PCR 检测方法,用于水产养殖过程中病害早期舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)的快速检测.方法 根据已经发表的舒伯特气单胞菌的rpoD 基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB 探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR 方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价.用建立的方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量进行检测. 结果 成功建立舒伯特气单胞菌TaqMan-MGB 实时荧光定量PCR 方法,该方法标准曲线有较好的线性关系；最低可以检测到18copies·μL-1rpoD 基因拷贝,30 个平行样品重复性试验组内变异系数为0.44＃；对其他10 种水产养殖常见细菌均无扩增反应.应用该方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量检测结果与活菌计数结果有较好的一致性.结论 建立的TaqMan-MGB 实时荧光定量PCR 方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于养殖水环境和鱼体组织中舒伯特气单胞菌的检测.
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