【摘 要】
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本研究利用已构建的基因工程重组菌BL21 (DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的Cap蛋白,纯化后作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经间接免
【机 构】
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天津瑞普生物技术股份有限公司研究院,天津 300308
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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本研究利用已构建的基因工程重组菌BL21 (DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的Cap蛋白,纯化后作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经间接免疫荧光试验(IFA)筛选,有限稀释法进行3次亚克隆后,最终获得5株稳定分泌抗PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3D12、4D5、489、4C9和4GIO,其中4D5为IgG2b亚型,其余4株单克隆抗体均为IgG1亚型,轻链类型均为Ko Westernblot鉴定表明获得的5株单克隆抗体均不能特异性的识别47kD的重组PCV2-Cap蛋白;而用病毒感染细胞进行的IFA试验中,5株单克隆抗体均特异性的识别病毒抗原,表明5株单抗识别的抗原表位均为构象表位.中和试验表明,5株单抗均有中和活性.本研究为进一步探索ORF2基因的结构及功能并建立快速准确的诊断方法奠定了基础.
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