[目的]通过模拟构建肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae） D39 SrtA的晶体结构及体外生物被膜试验,研究确定槲皮素抗分选酶A（Sortase A,SrtA）活性对肺炎链球菌生物被膜形成的抑制作用及分子机制。[方法]为了阐明其相互作用机制,本研究根据分子动力学模拟等结果,表达了SrtAΔN81重组蛋白质。应用分子对接、分子动力学模拟和复合物结合位点分析等计算生物学方法确证了槲皮素与SrtA的作用位点;利用QuickChange法对SrtAΔN81进行定点突变,获得H141A、R215A和C207A三种突变体;为验证理论计算结果,在体外试验中,将纯化的SrtAΔN81及突变子Spn-srtAΔ_N81H141A、Spn-srtAΔ_N81R215A和Spn-srtAΔ_N81C207A分别与不同浓度的槲皮素（0、12.5、25、50、100和200μM）于37℃相互作用15 min后,向体系中分别加入SrtA底物,通过检测样品的荧光强度,计算SrtAΔN81及其突变子的肽酶活性;通过在肺炎链球菌生物被膜形成体系中加入了不同浓度的槲皮素,以观察其对生物被膜形成的影响,进而确证槲皮素抗分选酶A活性抑制肺炎链球菌生物被膜形成的作用机制。[结果]本研究发现,槲皮素不仅能通过与天然底物特异性竞争,导致分选酶A的催化活性显著下调,还能够剂量依赖性地降低菌体表面NanA的含量,使NanA不能有效地锚定在细胞壁上,进而呈剂量依赖性地抑制肺炎链球菌生物被膜的形成,显著减弱细菌对宿主细胞的粘附作用。而当在培养物中加入唾液酸时,槲皮素不再能抑制生物被膜的形成。研究结果表明,槲皮素通过直接阻断肺炎链球菌表面蛋白NanA的锚定或间接减少唾液酸的产生,抑制肺炎链球菌生物被膜的形成,从而发挥抗感染作用。[结论]综上所述,天然化合物槲皮素能够通过与底物特异性竞争抑制SrtA活性进而影响肺炎链球菌生物被膜的形成。为槲皮素对肺炎链球菌SrtA的抑制作用及对肺炎链球菌感染的预防治疗机制提供了一种新的研究思路及策略。