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原生质体在生理生化、病毒与宿主互作、遗传育种、生物工程等植物基础及应用研究中具有重要价值.百脉根(Lotus corniculatus L.)是广泛应用于上述研究领域的一种豆科模式植物，制备良好的原生质体是其应用的基本前提.与下胚轴、子叶、组培苗嫩叶等外植体相比较，植物成熟叶片具有取材方便，操作容易，来源丰富等优势.本研究以里奥(Leon)百脉根的大田成熟叶片为材料研究其原生质体制备方法.