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根据GenBank上登录的JEV-E基因序列，设计了内外2对引物，以JEV疫苗株为模板，建立了检测猪乙型脑炎病毒的RT-nested-PCR方法。应用该方法对JEV疫苗株RNA进行扩增，获得与预期大小相符，长度为228bp的目的片段;检出JEV-RNA的灵敏度约为0.3pg。结果表明，所建立的RT-nested-PCR方法对JEV的检测敏感性高，特异性强、简便易行，是乙脑早期快速诊断的有力工具，为蚊虫媒介检测奠定了基础。