【摘 要】
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目的:肺炎支原体(MP)是引起小儿肺炎的重要病原体,本研究利用RNA恒温扩增(Simultaneous Amplification and Test,SAT)技术建立一种快速可靠的肺炎支原体16s rRNA的检测方法.方法:通过设计特异性的肺炎支原体(MP) 16s rRNA扩增引物及优化探针(optimal probe)技术,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对16s rRNA进行恒温的
【机 构】
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复旦大学附属儿科医院 201102
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的:肺炎支原体(MP)是引起小儿肺炎的重要病原体,本研究利用RNA恒温扩增(Simultaneous Amplification and Test,SAT)技术建立一种快速可靠的肺炎支原体16s rRNA的检测方法.方法:通过设计特异性的肺炎支原体(MP) 16s rRNA扩增引物及优化探针(optimal probe)技术,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对16s rRNA进行恒温的核酸扩增,利用荧光定量PCR仪进行实时的荧光信号收集和检测.收集复旦大学附属儿科医院2011年1月～6月肺炎或疑似患者呼吸道鼻咽分泌物样本221例,以肺炎支原体核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法:达安基因股份有限公司)为参比试剂做为金标准,DNA测序为扩大金标准,对研究数据进行Kappa一致性分析.结果:SAT技术共检测到70例肺炎支原体阳性标本,其中12例经传统荧光探针法检测为阴性,经测序证实其中10例仍为阳性.SAT与传统荧光探针法检测结果的Kappa值为0.869.SAT方法的敏感性为100％,特异性为98.69％,准确度为99.10％.结论:本研究建立的RNA恒温扩增技术检测肺炎支原体的方法具有敏感性高、特异性强、准确、耗时短、操作简便的优点,并能有效控制PCR片段的污染,较普通PCR方法中的DNA检测更能体现现行感染.适用于临床对儿童呼吸道标本中肺炎支原体感染的快速检测.
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