【摘 要】
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目的：探讨骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)及乙肝病毒X 蛋白(HBx)在乙肝相关性肝细胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)中对肝癌细胞干性的影响及与肝癌复发转移的关系.方法：采用real-time PCR、Western blot 及免疫组化等方法在乙型肝炎病毒(HBV)阳性的肝癌组织标本上检测病毒蛋白HBx 与OPN 及CD44、CD133(肝癌干细胞干性标
【机 构】
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第三军医大学大坪医院肝胆外科,重庆,邮编400041 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
【出 处】
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中国生物化学与分子生物学会2016年全国学术会议
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目的：探讨骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)及乙肝病毒X 蛋白(HBx)在乙肝相关性肝细胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)中对肝癌细胞干性的影响及与肝癌复发转移的关系.方法：采用real-time PCR、Western blot 及免疫组化等方法在乙型肝炎病毒(HBV)阳性的肝癌组织标本上检测病毒蛋白HBx 与OPN 及CD44、CD133(肝癌干细胞干性标志物)表达水平之间的相关性；进一步在培养的HepG2细胞中,通过瞬时基因转染方法表达HBx 蛋白,观察过表达HBx 对OPN 及CD44、CD133 mRNA 及蛋白质表达水平的影响；在稳定整合HBV 基因组、并稳定表达乙肝病毒蛋白的HepG2215 细胞系中验证HBX/OPN/肝癌细胞干性的关联性；在60例肝癌标本中分析OPN 的表达水平与HBx 蛋白表达量及其与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴转移、肿瘤分级、TNM 分期及预后等临床病理因素的关系.结果：RT-qPCR 及WB 检测结果均表明OPN 在乙肝相关性HCC 中表达显著增高,且与肿瘤分级、分期呈正相关,与患者术后生存时间呈负相关.HepG2215 细胞中OPN 含量较HepG2 细胞显著增加,肝癌干细胞表面标志物CD44、CD133 的表达水平显著升高；HepG2 细胞株分别转染HBx 后,OPN 表达量明显增加；流式细胞术定量分析HepG2215 细胞系中CD44、CD133 阳性的干性细胞数量明显高于HepG2 细胞系.结论：HBx 能够显著上调OPN 的表达,并增强肝癌细胞的干性.这些结果提示,HBX/OPN/肝癌细胞干性分子通路可能在肝癌的复发、转移中发挥重要作用,并影响肝癌患者预后.
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