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研究背景:肿瘤是严重威胁人类生命的重大疾病,且呈年轻化和逐年上升趋势,已成为人类死亡的主要原因之一。目前,化疗是肿瘤治疗的主要方法,而肿瘤化疗的难题之一就是肿瘤的多药耐药。ABCB1是ABC转运体亚家族ABCB的成员之一,是肿瘤耐药的重要转运蛋白,高表达于大部分耐药肿瘤细胞中。对于ABCB1基因的研究,目前主要在小鼠及耐药细胞株中进行,还没有关于用斑马鱼研究ABCB1基因的相关报道,目前在斑马鱼上缺乏很好的肿瘤耐药模型。本研究以斑马鱼为模式生物,将斑马鱼发育早期的胚胎用抗肿瘤药物长春碱(Vinblastine VBL)进行暴露实验,通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)和整胚胎原位杂交技术检测斑马鱼abcb4基因在药物暴露下的表达情况。为评价斑马鱼的abcb4基因在耐药机制中的研究提供科学依据。研究目的:通过研究长春碱(Vinblastine VBL)对斑马鱼早期发育过程中abcb4肿瘤耐药基因表达的影响,为进一步建立抗肿瘤药物多药耐药筛选的斑马鱼模型奠定重要的实验基础。研究方法:将长春碱稀释成不同浓度梯度的药液,在受精后0.5-1.5小时(0.5-1.5hpf)的斑马鱼胚胎上完成药物暴露实验,计算出IC50的数值。设置长春碱为实验组,胚胎培养用水为空白对照组,分别作用于0.5-1.5hpf的斑马鱼胚胎,观察24-120hpf的斑马鱼胚胎发育情况,记录畸形及死亡的胚胎数目;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR和胚胎整体原位杂交的方法,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量。研究结果:计算出长春碱在斑马鱼胚胎中的IC50为3.08 mmol/L;与对照组比较,实验组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平明显升高(P<0.05);通过胚胎整体原位杂交的方法,在120 hpf斑马鱼胚胎的小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且实验组斑马鱼胚胎在脑和心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号。研究结论:长春碱能明显增加斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因表达的水平,提示使用斑马鱼可以复制肿瘤耐药模型。