白杨素增强顺铂诱导胃癌细胞(BGC-823)凋亡的研究

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目的研究白杨素(chrysin,ChR)联合抗肿瘤药物顺铂抑制胃癌细胞(BGC-823)增殖,诱导其凋亡的作用,并初步探讨白杨素增强顺铂诱导胃癌细胞凋亡的抗肿瘤机制。方法选取人胃癌细胞(BGC-823),白杨素(10、20、40μmol·L-1)单独和联合顺铂(2.5、5.0、10.0μg·mL-1),作用时间为(24 h),采用MTT法,得出肿瘤细胞的抑制率;用Hoechst 33342荧光染色确定的凋亡形态,采用Western-Blot免疫印记法检测凋亡标志蛋白Caspase-3,Caspase-9和PARP原蛋白及其裂解产物;分析Bcl-2家族蛋白水平的表达。结果 MTT结果:白杨素与顺铂联合作用后,在普通倒置显微镜下观察,发现人胃癌细胞(BGC-823)细胞皱缩,碎片,甚至漂浮、死亡,表明白杨素与顺铂联合作用,使BGC-823细胞的敏感性增强,能提高肿瘤细胞的抑制增殖、诱导肿瘤细胞死亡的效果,并具有剂量-反应关系,本研究还发现,40μmol/L白杨素和10μg·mL-1剂量顺铂联合作用与白杨素/顺铂单独组比较,抑制率明显提高,差异均有非常显著意义(P<0.01);Hoechst 33342染色实验结果:白杨素联合顺铂处理人胃癌细胞(BGC-823)后,可在普通倒置显微镜下观察到人胃癌细胞(BGC-823)细胞密度降低,细胞皱缩,碎片,甚至漂浮、死亡,可在荧光显微镜下观察到细胞透亮且明显缩小的核固缩或碎裂所致的浓染致密的块状荧光、凋亡小体形成等细胞凋亡形态。白杨素与顺铂联合处理后浓染的细胞凋亡数与未做处理的阴性对照细胞比较有显著增加(P<0.01),本研究还发现,联合作用处理与白杨素/顺铂单独作用比较,都有显著性意义(P<0.01);Western-Blot免疫印记分析结果:细胞凋亡标志蛋白Caspase-3,Caspase-9和PARP原蛋白在白杨素和顺铂联合作用下与对照及单独作用比较都有明显减少,并有浓度、时间效应关系;凋亡抑制蛋白Bcl-2减少,凋亡促进蛋白Bax增加表达。结论白杨素能增强顺铂抑制人胃癌细胞(BGC-823)的增殖和诱导人肿瘤细胞的凋亡作用,凋亡机制可能与Caspase-9、Caspase-3蛋白活化,降解PARP原蛋白,Bax激活,Bcl-2失活有关。本研究为抗癌辅助药的研究开发提供实验室依据。
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