【摘 要】
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引言/目的 早孕因子(Early pregnancy factor,EPF)是母体受精后从血清中检测出最早与妊娠相关的蛋白,是与妊娠相关的免疫抑制因子,被认为是最早能确认妊娠的生化指标之一[1].在养殖生产中,利用早孕因子的特异性可以及时进行绵羊的妊娠诊断,减少其空怀发生,为提高生产效率提供重要意义.同时,EPF可用于预测早期胚胎发育,帮助了解妊娠母体对胚胎的识别、免疫耐受等机制[2,3].材料方
【机 构】
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河北农业大学动物科技学院,河北保定071000
【出 处】
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2015年全国养羊生产与学术研讨会
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引言/目的 早孕因子(Early pregnancy factor,EPF)是母体受精后从血清中检测出最早与妊娠相关的蛋白,是与妊娠相关的免疫抑制因子,被认为是最早能确认妊娠的生化指标之一[1].在养殖生产中,利用早孕因子的特异性可以及时进行绵羊的妊娠诊断,减少其空怀发生,为提高生产效率提供重要意义.同时,EPF可用于预测早期胚胎发育,帮助了解妊娠母体对胚胎的识别、免疫耐受等机制[2,3].材料方法对重组表达菌pGEX4t-EPF-BL21 (DE)进行IPTG诱导剂,对诱导剂IPTG进行条件优化.将表达出的绵羊早孕因子重组蛋白(EPF-GST),通过亲和吸附层析柱对蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE进行鉴定.以纯化后的EPF重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,免疫3次,每次免疫时间间隔为15天,后采用间接ELISA方法检测小鼠效价,取效价合格小鼠(N/P≧2)的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞和细胞株,经有限稀释法将筛选的细胞株注入小鼠腹腔,用G-sepharose柱亲合层析法对小鼠腹水型抗体进行纯化,应用SDS-PAGE和Western blot分析抗体纯化后的纯度及特异性.
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