【摘 要】
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[目的]为了深入探究冷藏水产品的特定腐败菌波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)的群体感应现象对其致腐能力的影响,本研究采用PCR融合和同源重组的方法构建S.baltica的luxR基因缺失株.[方法]利用PCR扩增获得luxR的上下游片段,然后用PCR融合方法将上下游片段连接起来,融合产物导入质粒pHG1.0后,把重组质粒导入大肠杆菌E.coil WM3064,通过接合反应将质
【机 构】
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中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266100
【出 处】
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2016年中国水产学会水产品加工与综合利用分会学术年会
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[目的]为了深入探究冷藏水产品的特定腐败菌波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)的群体感应现象对其致腐能力的影响,本研究采用PCR融合和同源重组的方法构建S.baltica的luxR基因缺失株.[方法]利用PCR扩增获得luxR的上下游片段,然后用PCR融合方法将上下游片段连接起来,融合产物导入质粒pHG1.0后,把重组质粒导入大肠杆菌E.coil WM3064,通过接合反应将质粒从E.coil WM3064转移到野生型S.baltica中,利用庆大霉素、蔗糖致死和PCR验证筛选出含重组质粒的S.baltica.[结果]菌落PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,从突变株中未扩增出luxR片段,表明成功敲除了S.baltica的luxR片段.[结论]成功构建一株luxR基因缺失的S.baltica菌株,为后续研究S.baltica的luxR基因功能及致腐机制提供基础.
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