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目的探讨Toll样受体的配体作为佐剂,对日本血吸虫DNA疫苗免疫效应的影响。方法将TLR7/8配体R848和TLR9配体CpG寡核苷酸(CpG)作为已构建的、编码日本血吸虫26 kD谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗(pVAX1-Sj26GST)佐剂,ELISA检测免疫小鼠脾细胞培养上清中Th1、Th2相关细胞因子及血清中抗原特异性抗体的变化;流式细胞分析技术检测免疫小鼠脾细胞CD4~+CD25~+FoxP3+调节性T细胞(Treg)的比例;免疫小鼠经日本血吸虫尾蚴攻击感染后,计算小鼠的减虫率、减卵率,检测CpG、R848对疫苗效应的影响。结果与单独的pVAX1-Sj26GST疫苗或pVAX1-Sj26GST协同CpG或R848免疫小鼠相比,pVAX1-Sj26GST协同CpG和R848免疫可显著增强小鼠脾细胞的增殖反应,血清中IgG抗体的产生;pVAX1-Sj26GST+CpG+R848组小鼠脾细胞培养上清中IFN-y、TNF-α的水平分别为(77.56+17.23)、(10 309.08±2 462.577)pg/ml,显著高于pVAX1-Sj26GST组[(48.79±15.80)、(4 761.65±1 574.15)pg/ml]、pVAX1-Sj26GST+CpG组[(49.57±8.57)、(4 651.31±1 317.51)pg/ml]、pVAX1-Sj26GST+R848组[(42.98±12.98)、(4 626.39±2 287.34)pg/ml](均P<0.01),但IL-4、IL-10的水平显著低于pVAX1对照组(均P<0.05);与免疫前相比,除了pVAX1-Sj26GST+CpG+R848组小鼠脾细胞中CD4~+CD25+FoxP3+Treg细胞的比例显著降低外,其它组免疫小鼠脾细胞中CD4~+CD25~+FoxP3+Treg细胞的比例均显著升高(均P<0.05);与其它免疫组相比,pVAX1-Sj26GST+CpG+R848免疫诱导了更强的减虫率和减卵率(均P<0.05)。结论 TLRs配体CpG和R848协同显著增强日本血吸虫疫苗pVAX1-Sj26GST的免疫反应及保护性,这种增强的免疫效应可能与脾细胞中较低的CD4~+CD25~+FoxP3+Treg细胞比例有关。