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迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是养殖鱼类的重要病原菌,疫苗免疫是预防鱼类病害的重要手段。本研究利用基因缺失突变技术,以迟缓爱德华氏菌LSE40的7个毒力或营养相关基因(purA,asd,aroA,esrB,esaC,evpH和rpoS)为靶基因,构建了3株单基因缺失株:LSE40ΔaroA、LSE40ΔpurA、LSE40Δasd;7株双基因缺失株:LSE40ΔaroAΔesrB、LSE40ΔpurAΔesrB、LSE40ΔpurAΔaroA、LSE40ΔaroAΔesaC、LSE40ΔaroAΔrpoS、LSE40ΔaroAΔevpH、LSE40ΔesrBΔevpH;2株三基因缺失株:LSE40ΔaroAΔesrBΔevpH和LSE40ΔaroAΔesaCΔevpH。以蓝蔓龙作为实验鱼检测发现LSE40ΔaroA、LSE40ΔaroAΔesaCΔevpH和LSE40ΔaroAΔesrBΔevpH三株弱毒株没有提供免疫保护;其他9株弱毒株提供21.7%-82.6%免疫保护率(RPS)。选取RPS较高的三株双基因缺失突变株LSE40ΔaroAΔesrB、LSE40ΔaroAΔesaC和LSE40ΔaroAΔevpH对牙鲆浸泡免疫,以野生株注射攻毒的RPS分别为45%、25%和20%,浸泡攻毒的RPS为100%、66.7%和66.7%。结果显示,LSE40ΔaroAΔesrB、LSE40ΔaroAΔesaC、LSE40ΔaroAΔevpH对牙鲆提供较好的免疫保护。以LSE40ΔaroAΔesrB注射免疫大菱鲆,107和106cfu免疫组注射攻毒时RPS分别为20%和10%,105cfu免疫组不能提供免疫保护效果;浸泡和口服途径免疫大菱鲆,均未能提供免疫保护。综合上述结果,弱毒疫苗对蓝蔓龙和牙鲆提供良好的免疫保护,对大菱鲆未提供免疫保护。