论文部分内容阅读
目的 观察烟酸姜黄素酯(Curcumin nicotinate, NC)对THP-1细胞内ox-LDL聚集与胆固醇流出的影响,并探讨该作用是否通过促进ox-LDL的自噬性降解。方法 以100 μg/ml的oxLDL孵育THP-1细胞,采用Western blotting方法检测自噬相关蛋白LC3与p62的含量。自噬抑制剂氯喹和诱导剂雷帕霉素(Rap)干预下,观察THP-1细胞内oxLDL蓄积与胆固醇含量变化。在10 μM的NC干预下,并通过自噬抑制剂氯喹阻断,以Dil-oxLDL (100 μg/ml)处理THP-1细胞36 h,观察THP-1细胞内Dil-ox-LDL聚集量的变化；液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,ELISA分析细胞内总胆固醇含量；透射电镜观察细胞超微结构；免疫印迹方法检测LC3-Ⅱ、p62及PI3K/mTOR途径蛋白的表达；免疫荧光技术观察THP-1细胞内Dil-ox-LDL与自噬标记物LC3-Ⅱ共定位；腺病毒荧光双标载体转染细胞,激光共聚焦观察自噬流的变化。结果 Western blotting检测结果表明ox-LDL损害细胞自噬自噬流；且细胞内的oxLDL大量蓄积及胆固醇流出明显减少；氯喹进一步增加oxLDL在THP-1细胞内积聚,Rap明显减少ox-LDL的积聚。免疫印迹技术检测结果显示,NC显著增加ox-LDL处理细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值以及明显减少p62蛋白的表达；NC减少PI3K以及磷酸化mTOR与p70S6K的表达；mCherry-GFP-LC3Ⅱ荧光双标、激光共聚焦技术观察结果证实,NC恢复ox-LDL诱导细胞的自噬流；NC能够显著减少ox-LDL在THP-1细胞内积聚,增加细胞内胆固醇流出；透射电镜检测与免疫荧光技术观察结果均表明,NC能够增加ox-LDL与自噬体的共定位,促进细胞内脂质的自噬性降解；该作用能被自噬的抑制剂氯喹所拮抗。结论 NC显著减少THP-1细胞内ox-LDL积聚以及明显促进胆固醇流出,该作用与其激活自噬,促进细胞内ox-LDL的自噬性降解有关。