【摘 要】
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目的:建立牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）ATCC33277侵入口腔上皮癌KB细胞模型,研究维生素D对细胞内细菌生存情况的影响;观察活性形式维生素D,骨化三醇
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目的:建立牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）ATCC33277侵入口腔上皮癌KB细胞模型,研究维生素D对细胞内细菌生存情况的影响;观察活性形式维生素D,骨化三醇（1,25（OH）2D3,1,25D）对KB细胞自噬和LL-37表达的影响,分析LL-37在1,25D促进细胞自噬过程中的作用。方法:采用q RT-PCR法和细菌培养法检测P.gingivalis数量;比较1,25D在不同浓度及不同处理时间,对KB细胞LL-37 mRNA和蛋白表达水平的影响;Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ比值,分析1,25D对KB细胞自噬的影响;LL-37 si RNA转染细胞后观察1,25D诱导KB细胞自噬的变化。结果:与对照组相比,1,25D处理组KB细胞内的P.gingivalis数量均有不同程度减少。10-12mol/L、10-10 mol/L、10-8 mol/L 1,25D处理组分别为对照组的0.66倍,0.45倍,0.25倍,最高抑菌浓度10-8 mol/L。琼脂板培养法结果和q RT-PCR检测法和基本一致。10-8 mol/L 1,25D24h时抑菌效果最明显。1,25D以剂量依赖性和时间依赖性促进KB细胞LL-37 mRNA表达,10-8 mol/L 1,25D 18h时作用最强,为对照组3.53倍。1,25D促进KB细胞LL-37蛋白的表达,并促进细胞自噬,抑制LL-37表达可抑制1,25D诱导的KB细胞自噬。结论:1,25D显著降低KB细胞内P.gingivalis活菌数量。1,25D促进KB细胞LL-37表达。1,25D通过LL-37促进KB细胞自噬,并可能通过这一途径降低细胞内活菌数量。
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