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目的通过改进培养基及细胞因子体系从而制订更优的NK细胞体外培养扩增方案,为临床NK免疫细胞治疗提供实验依据。方法 4例血细胞分离机单采的新鲜白细胞及3例复苏的G-CSF动员后的外周血造血干细胞(PBSCs),通过破红、去血小板、弃贴壁细胞等处理,调节悬浮细胞浓度至5×106/ml,添加细胞因子(包括1000U/mlrh IL2、10ng/ml rh IL12、10ng/ml rh IL15、10ng/ml rh IL21)后培养于37℃5%CO2孵箱中6天。根据不同培养基及是否添加rh IL-18将实验组分为AIM-V±rh-IL18组及SCGM±rh-IL18组,rh IL-18浓度为20ng/ml。每隔2~3天半量换液,调节细胞浓度至2×106/ml,并补充相应细胞因子。收集培养到第3天(D3)及第6天(D6)的细胞进行计数、NK纯度及功能表型检测。结果 SCGM+rh IL18相比AIM-V组能使NK细胞扩增能力明显增强,培养到D6天NK细胞绝对值上调4~8倍,NK纯度提高10%~20%(P<0.05)。培养到D6天时,SCGM+rh IL18相比AIM-V组能使NK细胞的穿孔素、颗粒酶的表达分别上调(19±4)%及(10±4)%(P<0.05),迁移表型CD62L及成熟表型CD57的表达分别上调(12±4)%及(7±2)%(P<0.05)。而且SCGM+rh IL18能使NK细胞分泌更高水平IFNγ(P<0.05)。另外,NK细胞的功能表型及分泌IFNγ的能力随着培养时间的延长明显递增(D6>D3>D0)(P<0.05)。结论本实验证明SCGM培养基联合IL-12/15/18是体外培养制备NK细胞的更好策略,能进一步提高NK细胞的纯度、绝对值、功能表型及分泌IFNγ的能力。本实验为临床上同种异体NK细胞治疗移植后复发AML提供了理论依据:有望进一步提高GVL效应并减少GVHD发生。