目的 探讨整合素连接激酶(intergrin-linked kinase,ILK)对增生性瘢痕血管生成的影响及调控机制.方法 收集6例增生期的瘢痕组织标本,体外分离培养瘢痕微血管内皮细胞(HSMECs),取2～4代生长状态良好的细胞,并分成4组:空白对照组,常规细胞培养;阴性对照组,只加入Lipo2000转染试剂;LY294002组,加入终浓度50 nmol/L的LY294002;ILK siRNA组,加入终浓度为20 nmol/L的ILK siRNA.转染48 h后,采用RT-PCR法及Western Blot法检测ILK mRNA和蛋白表达的变化.利用Transwell法,收集转染后的4组HSMECs,用不含血清的DMEM重悬,种入上层小室,下层加完全培养基,10h后终止实验,计算各组细胞迁移数,观察不同处理因素对HSMECs迁移能力的影响.将冻融的ECMatrix基质胶在冰面上均匀的铺入预冷的48孔板中,37℃温箱孵育使其凝胶,然后取转染后的4组细胞种入胶面上,8h后终止实验,依据血管形成模式评分表随机选择8个视野进行评分,分析各组细胞的体外血管形成能力.结果 ①与空白对照组(ILK mRNA=0.829±0.109、ILK蛋白=1)相对比,ILK siRNA组HSMECs内ILK mRNA表达水平(ILK mRNA=0.002±0.000;t=13.151,P=0.006)及蛋白表达水平(ILK蛋白=0.096±0.049;t=36.656,P=0.000)均明显受到抑制,而LY294002组ILK的表达虽略有降低,但差异无统计学意义.②ILK siRNA组与LY294002组在10 h时的细胞迁移数分别为88.111 ±3.079、138.667±2.404,较空白对照组322.333±3.712显著降低(P＜0.05).③在体外血管形成8h时,ILK siRNA组(2.625±0.125)和LY294002组(3.125±0.250)与空白对照组(4.333±0.191)相比,体外血管形成受到明显的抑制,无法形成完整的复杂网络结构(P＜0.05).结论 在ILK表达下调的情况下,HSMECs的迁移能力与体外血管形成能力均受到明显抑制,推论ILK可能参与对瘢痕血管生成的调控。
整合素连接激酶对增生期瘢痕血管生成的调控作用
【摘 要】
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目的 探讨整合素连接激酶(intergrin-linked kinase,ILK)对增生性瘢痕血管生成的影响及调控机制.方法 收集6例增生期的瘢痕组织标本,体外分离培养瘢痕微血管内皮细胞(HSMECs),取2～4代生长状态良好的细胞,并分成4组:空白对照组,常规细胞培养;阴性对照组,只加入Lipo2000转染试剂;LY294002组,加入终浓度50 nmol/L的LY294002;ILK siRN
【机 构】
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510220广州,暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科,510220广州,暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科,510220广州,暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科,510220广州,暨
【出 处】
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中华整形外科杂志
【发表日期】
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2013年29期
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