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背景:脉络膜黑色素瘤是一种常见于成人的眼内恶性肿瘤。基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶-9(MMP-2/MMP-9)与眼内黑色素瘤的血管新生、肿瘤转移等事件均具有相关性。microRNA与非编码长链RNA或存在靶向干预MMP-2/MMP-9的作用,其中miR-296-3p与FOXCUT是两种具有MMP家族结合位点的非编码RNA,但两者在脉络膜黑色素瘤领域的具体作用与机制尚缺乏足够的实验证据。目的:验证脉络膜黑色素瘤组织MMP-2和MMP-9的表达情况,证实miR-296-3p与FOXCUT是抑制脉络膜黑色素瘤组织MMP-2和MMP-9表达的非编码RNA靶点,揭示miR-296-3p与FOXCUT抑制脉络膜黑色素瘤的具体机制以及两者协同治疗的可行性。方法:我们使用组织芯片技术分析了6例正常脉络膜临床样本与18例脉络膜黑色素瘤患者的肿瘤样本。细胞实验采用人源性脉络膜黑色素细胞与人源性脉络膜黑色素瘤细胞C918细胞系。提取细胞系总mRNA、总蛋白,分别使用实时荧光定量PCR与Western Blot实验检验样本中的MMP-2/MMP-9的mRNA与蛋白表达。使用组织芯片进行原位杂交(ISH)实验与免疫组织化学(IHC)实验,检测MMP-2/MMP-9的mRNA与蛋白表达在组织中空间分布情况。基于组织芯片原位杂交(ISH)实验所得数据,使用数据库或软件分析miR-296-3p/FOXCUT与MMP-2/MMP-9的亲和力。构建荧光素酶报告基因miR-296-3p靶基因载体与FOXCUT慢病毒载体分别靶向升高C918细胞的mi R-296-3p与FOXCUT表达。使用实时荧光定量PCR技术和Western Blot实验分别检测转染后的C918细胞中MMP-2/MMP-9的mRNA和蛋白的转录与翻译水平。在机制研究方面,使用CCK-8实验检测转染后的C918细胞的增殖情况;使用平板克隆实验检测转染后的C918细胞的集落分布情况;使用划痕实验评估转染后的C918细胞的的迁移能力;使用Transwell实验检测转染后的C918细胞的侵袭能力;使用流式细胞术实验分别检测转染后的C918细胞的细胞周期分布情况以及细胞凋亡水平。为了进一步确定miR-296-3p与FOXCUT具有治疗协同性,我们使用组织原位杂交(ISH)芯片实验检测miR-296-3p与FOXCUT在脉络膜黑色素瘤肿瘤组织中的空间分布情况,并在C918细胞内完成miR-296-3p与FOXCUT共转染干预,通过流式细胞术实验检测miR-296-3p与FOXCUT共转染后的C918细胞的细胞凋亡水平,再通过CCK-8实验检测miR-296-3p与FOXCUT共转染后的C918细胞的细胞增殖情况。结果:与正常人源性脉络膜黑色素细胞相比,脉络膜黑色素瘤肿瘤组织内MMP-2/MMP-9的mRNA、蛋白表达水平均显著升高。组织原位杂交(ISH)芯片实验与免疫组织化学(IHC)染色实验证实MMP-2/MMP-9的mRNA、蛋白表达水平升高仅出现于肿瘤细胞。且脉络膜黑色素瘤细胞体外培养实验显示,与正常人源性脉络膜黑色素细胞相比,脉络膜黑色素瘤C918细胞的MMP-2/MMP-9的mRNA、蛋白表达水平显著升高。组织原位杂交(ISH)芯片数据分析提示mi R-296-3p、FOXCUT两种非编码RNA或是MMP-2/MMP-9的非编码RNA靶点,且序列互补分析显示miR-296-3p与MMP-2/MMP-9的mRNA存在高度互补性。进一步的探针实验显示,miR-296-3p与FOXCUT均具有结合MMP-2/MMP-9的核苷酸序列,且能够靶向结合MMP-2/MMP-9。体外实时荧光定量PCR实验与Western Blot实验显示,与转染空白载体的C918细胞相比,miR-296-3p过表达后的C918细胞内的MMP-2/MMP-9的mRNA转录及蛋白质翻译水平显著降低,且具有统计学差异,这提示我们miR-296-3p可以通过直接结合MMP-2/MMP-9的m RNA调控MMP-2和MMP-9表达。CCK-8实验结果统计分析显示,与转染空白载体的C918细胞相比,miR-296-3p或FOXCUT过表达后能够显著降低C918肿瘤细胞的增殖活力。平板克隆实验显示,与转染空白载体的C918细胞相比,miR-296-3p或FOXCUT过表达的C918细胞集落能力显著降低,表现为集落数量减少、集落直径减小,这意味着miR-296-3p或FOXCUT过表达后在细胞集落层面抑制了C918细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期实验显示,与空白质粒转染的C918细胞相比,miR-296-3p或FOXCUT过表达后能够导致C918细胞的细胞周期比例发生显著变化,具体表现为降低G0/G1期比例,增加细胞S期比例,但不影响细胞G2/M期,这提示miR-296-3p或FOXCUT能够通过靶向结合MMP-2/MMP-9阻滞细胞DNA合成期(S期),从而导致部分C918细胞不能完成正常细胞周期。同时,流式细胞术检测细胞凋亡的实验结果显示,与空白质粒转染的C918细胞相比,miR-296-3p或FOXCUT过表达能够导致C918细胞的凋亡水平显著升高,这说明miR-296-3p或FOXCUT过表达对于细胞周期的影响最终可以诱导肿瘤细胞凋亡。划痕实验结果显示,与空白质粒转染的C918细胞相比,miR-296-3p或FOXCUT过表达的C918细胞迁移能力显著降低,具体表现为迁移细胞比例降低与迁移距离缩短,这证实miR-296-3p或FOXCUT过表达后能够抑制脉络膜黑色素瘤C918细胞的细胞迁移。Transwell实验结果显示,与空白质粒转染的C918细胞相比,miR-296-3p或FOXCUT过表达的C918细胞侵袭能力显著降低,具体表现为迁移细胞比例降低与迁移距离缩短,这证实miR-296-3p或FOXCUT过表达能够抑制脉络膜黑色素瘤C918细胞迁移。组织原位杂交(ISH)芯片实验证实,脉络膜黑色素瘤中mi R-296-3p下调与FOXCUT下调具有相关性。流式细胞术实验结果分析显示,与单一过表达miR-296-3p或FOXCUT的C918细胞相比,miR-296-3p与FOXCUT联合过表达能够导致C918细胞凋亡水平显著升高。CCK-8实验结果统计分析显示,与单一过表达miR-296-3p或FOXCUT的C918细胞相比,miR-296-3p与FOXCUT联合过表达显著降低了C918细胞的增值活力。结论:脉络膜黑色素瘤肿瘤组织存在MMP-2/MMP-9表达异常升高。miR-296-3p与FOXCUT两种非编码RNA或是MMP-2/MMP-9的非编码RNA靶点,且两者均能通过降低MMP-2/MMP-9表达抑制脉络膜黑色素瘤,其机制涉及到肿瘤细胞的周期调控、凋亡、增殖、迁移及侵袭等多种细胞事件。脉络膜黑色素瘤的mi R-296-3p与FOXCUT两种非编码RNA存在表达相关性,且miR-296-3p及FOXCUT联合靶向治疗能够显著抑制脉络膜黑色素瘤。