【摘 要】
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根据已发表的番鸭呼肠孤病毒sigma C蛋白基因核酸序列设计引物,利用RT-PCR技术,扩增番鸭呼肠孤病毒MW9710株sigma C蛋白基因,经T/A克隆,插入到pMD18-T载体上,测序分析结果表明:MW9710株sigma C蛋白基因的开放阅读框为810nt、编码由269个氨基酸组成、分子量为29.4kDa的sigma C蛋白.经BLAST等分子生物学软件分析,其与法国MDRV89330株
【机 构】
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福建省农业科学院畜牧兽医研究所(福建福州)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
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根据已发表的番鸭呼肠孤病毒sigma C蛋白基因核酸序列设计引物,利用RT-PCR技术,扩增番鸭呼肠孤病毒MW9710株sigma C蛋白基因,经T/A克隆,插入到pMD18-T载体上,测序分析结果表明:MW9710株sigma C蛋白基因的开放阅读框为810nt、编码由269个氨基酸组成、分子量为29.4kDa的sigma C蛋白.经BLAST等分子生物学软件分析,其与法国MDRV89330株的sigma C蛋白基因的同源率达93﹪、所推导氨基酸的同源率达92﹪,与ARV的核苷酸无同源性、推导的氨基酸的同源率为26﹪.经Antheprot5.0蛋白质软件分析表明:MW9710株sigma C蛋白具有较大的疏水和抗原性,无跨膜区,为进一步研究该基因表达和研制基因工程疫苗及诊断试剂奠定了基础.
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免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗
从黑龙江省某地区养殖场采集了发病鹅雏气管和肺脏病料,经鸡胚传代分离到两株具有鸡红细胞凝集活性的病毒,经血凝抑制试验鉴定为H9亚型禽兽流感病毒.采用RT-PCR技术扩增了鹅分离株的血凝素基因,经序列分析发现两个分离株之间基因序列同源率为99.7﹪.经Blast软件分析发现分离株与流感病毒基因数据库收录的A/Chicken/HongKong/WF2/99的同源率最高,同源率为99.7﹪分离株实验感染鹅
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