【摘 要】
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为了建立荧光定量PCR检测鸡IL-1β,IL-2及IL-6基因的方法,根据Gen?ank上IL-1β,IL-2,IL-6的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,选择β-actin和GAPDH为内参,采用SYBRGr
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心,动物疫病与人类健康四川省重点实验室
【基金项目】
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教育部长江学者和创新团队发展计划IRT0848;四川省科技厅国际合作项目2008HH0016资助
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为了建立荧光定量PCR检测鸡IL-1β,IL-2及IL-6基因的方法,根据Gen?ank上IL-1β,IL-2,IL-6的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,选择β-actin和GAPDH为内参,采用SYBRGreen I染料法,以常规PCR产物为标准品,建立标准曲线,并进行熔解曲线分析。结果表明,各基因标准曲线Ct值检测范围在12-33左右,有良好的线性关系,r~2均大于0.990。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。本实验建立的鸡IL-1β,IL-2及IL-6基因实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,为从mRNA水平对鸡IL进行定量分析奠定了基础。
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