背景:由于单克隆抗体(单抗,mAb)特异性高、靶向性强和毒副作用少等特点作为治疗性抗体药物广泛应用于临床。治疗性抗体药物研发成为备受关注的研究热点。目前,治疗性抗体药物主要来源于人鼠嵌合型和人源化抗体。由于全人源单抗制备技术的限制,全人源抗体药物仍然满足不了巨大的生物药物市场需求。前期研究,我们研发高亲和力单抗制备技术,并利用该技术制备高亲和力的全人源单抗包括抗乙型肝炎病毒(HBsAb)、流感病毒(Influenza Ab)、肿瘤坏死因子相关凋亡Ⅰ型受体(TRAIL-R1 Ab)以及兔源双肾上腺皮质激素样激酶(DCLK1Ab)单抗。目的:筛选和制备单克隆抗体并进行功能特性鉴定和分析。方法:利用EXPi293T蛋白表达系统制备抗体蛋白;利用ELISA方法进行特异性和亲和力的分析;利用体外细胞实验对抗病毒(HBV和Influenza V)抗体进行了抗病毒作用效果观察;体外实验TRAIL-R1抗体诱导细胞凋亡作用的观察;利用免疫荧光技术对抗DCLK1抗体进行组织表达和抗原定位分析。结果:这些抗体均具有较高的抗原特异性和亲和力;在30余株抗HBsAg单抗中,检测到抑制病毒复制的中和性抗体;在19株流感病毒单抗中,发现大部分的抗体具有与流感病毒亚型广谱交叉结合能力,并发现一株与流感病毒保守区基质外壳蛋白(M2e)结合的能力;分离出10株功能特性各异的全人源TRAIL-R1抗体,在二抗偶联作用具有较强的抗凋亡作用,并发现部分抗体与TRAIL联合作用,能提高诱导细胞凋亡作用。利用免疫荧光技术,发现Dclk抗体对细胞内表达的Dclk1具有很强的结合能力。结论:通过研发的单抗技术,制备多种类多样性的单抗;这些单抗具有较高的特异性和亲和力以及多样的功能特性,为抗体药物的研发和相关疾病机制研究提供重要研究基础。