【摘 要】
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目的：探讨基于基因组DNA肿瘤细胞特异性序列的微量残留病(MRD)检测方案的可行性和具体操作流程.方法：基因组中融合基因断裂点及其侧翼序列是区分肿瘤细胞的分子遗传学标记物,通过分析大量TEL-AML1阳性患儿转录水平TEL-AML1融合基因的序列获得其常见的融合方式及其基因组水平断裂点大致位置信息.针对可能存在融合基因断裂点的基因组序列,设计可覆盖所有断裂点的长距离PCR引物.对上述引物进行分组,
【机 构】
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上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心血液肿瘤科 200127
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目的：探讨基于基因组DNA肿瘤细胞特异性序列的微量残留病(MRD)检测方案的可行性和具体操作流程.
方法：基因组中融合基因断裂点及其侧翼序列是区分肿瘤细胞的分子遗传学标记物,通过分析大量TEL-AML1阳性患儿转录水平TEL-AML1融合基因的序列获得其常见的融合方式及其基因组水平断裂点大致位置信息.针对可能存在融合基因断裂点的基因组序列,设计可覆盖所有断裂点的长距离PCR引物.对上述引物进行分组,通过相近位置的多重引物PCR获得初步的基因组融合位点信息.对可能存在融合位点的长距离PCR产物进行再次单一引物对长距离PCR反应和酶切分析,获得基因组融合位点的相对精确位置信息.
结果：针对所有断裂点设计了3条TEL及30条AML长距离PCR引物，相邻两条引物间距4-5Kbp，将3条TEL引物作为一组正向引物，30条AML引物依据前后顺序分为10组反向引物，使用TEL-AML1阳性患儿的基因组DNA同时进行10组长距离多重引物PCR,针对PCR产物进行电泳分析，通过电泳条带的大小推测可能覆盖融合断裂点的引物组合。
结论：鉴于基因组水平融合基因断裂点有高度稳定性，此检测方案可用于TEL-AML1阳性患儿的后续MRD监测。
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