目的:探讨不同的抗凝剂及血液保存时间对细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞的增殖和功能的影响。方法:实验分两个部分,首先检测不同抗凝剂对后续培养的影响,采集健康志愿者外周血,添加EDTA、肝素钠、枸橼酸纳抗凝,采血后2 h内完成操作,CFSE染色法检测后续培养中细胞的增值能力;第二部分,采用肝素钠抗凝,采血后在室温(约20℃)、4℃冰箱中分别放置0、4、8、24 h后,进行培养,CFSE染色法检测后续培养中细胞的增值能力,流式细胞术检测CIK细胞中T细胞亚群比例、颗粒酶、IFN-γ、穿孔素的分泌情况,以及培养11 d细胞对Hela细胞的杀伤作用并检测CIK细胞的增值、活力和细胞毒作用。结果:EDTA抗凝时,CIK细胞扩增数量无明显变化,于第7天开始出现迅速下降,并趋向于零;肝素钠抗凝时,CIK细胞扩增数量在第5天开始出现明显上升,于第11天达到高峰,细胞数量比起始培养扩增14.33倍,之后迅速下降;枸橼酸钠抗凝时,CIK细胞扩增数量在第9天出现明显上升,于11 d达到高峰,细胞数量比起始培养扩增12倍,之后迅速下降;使用肝素钠抗凝,从实验结果来看,所培养的CIK细胞分泌IL-12的能力明显增强。相对而言,常温下即刻分离细胞和4℃的条件下保存4 h组,分泌情况最佳,而4℃的条件下保存24 h和室温下保存8 h,有明显下降。常温下即刻分离细胞和4℃的条件下保存4 h组,CD3+CD56+,CD3-CD56+的比例略高于其余各组;而4℃的保存4 h条件下培养出来的CIK细胞群中,CD4+CD25+细胞比例要略低于其余各组。各组CIK细胞均可以表现出一定的杀瘤活性,常温下即刻分离细胞和4℃的条件下保存4 h组杀伤能力最强。结论:枸橼酸钠和肝素钠均可以用作CIK采血的抗凝剂,肝素钠的效果更佳。而使用肝素钠抗凝后,血液标本在常温下2 h、4℃时保存4 h,不影响后续细胞培养的效果。