【摘 要】
：
目的 建立一种简便快速高分辨率的珠蛋白肽链反相液相色谱分离技术并探讨其临床应用价值,为同类工作提供一种有参考价值的经验.方法 采用梯度洗脱,菲罗门Jupiter C 18(250×4.6mm,5μm,300A)色谱柱,流动相A为乙腈/甲醇(90：10),流动相B为0.5％三氟乙酸(TFA)水溶液(调节至pH2.6),流速2.0ml/min,柱温40℃,检测波长280nm,50μl全血溶解于1ml去
【机 构】
：
南方医科大学医学遗传学教研室,广州510515 广东省计划生育科学技术研究所,广州510600
【出 处】
：
中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议
论文部分内容阅读
目的 建立一种简便快速高分辨率的珠蛋白肽链反相液相色谱分离技术并探讨其临床应用价值,为同类工作提供一种有参考价值的经验.方法 采用梯度洗脱,菲罗门Jupiter C 18(250×4.6mm,5μm,300A)色谱柱,流动相A为乙腈/甲醇(90：10),流动相B为0.5％三氟乙酸(TFA)水溶液(调节至pH2.6),流速2.0ml/min,柱温40℃,检测波长280nm,50μl全血溶解于1ml去离子超纯水,3000r/min离心5min后直接进样10μl,选择25％-60％乙腈疏水性范围内筛选并优化色谱条件；观察不同流速、pH、梯度时间以及波长对珠蛋白肽链色谱分离行为的影响并进行保留时间和峰面积重复性评价；用所建立的最优色谱条件分析临床标本共301份(其中正常成人样本106份,α静止性/标准型60份,HbH病59例,β携带者46份,β中重型30份),基于正常组与各病例组多重比较结果,采用ROC曲线分析δ/β,α/β,α/preβ+β+δ,δ,α/preβ+β,δ/preβ+β六个指标对于β地中海贫血携带者、α/β和α/preβ+β对于HbH病的筛查效率,通过比较获得最优指标及其截断值；另外用此色谱条件对常见异常血红蛋白HbE及HBWS进行分析.结果 经过筛选得到最优色谱条件如下：0-1 min 51％流动相B,1-2min 51-50％流动相B,2-12min 50-40％流动相B；在此色谱条件下,heme,preβ,β,δ,α,Gγ,Aγ在12min内得到很好分离,同一样品连续五次进样,各成分保留时间变异系数(CV)为0.11-1.29％,峰面积变异系数(CV)为0.32-4.86％；提高流速使各成分保留时间均提前,缩短梯度时间主要使各珠蛋白肽链保留时间缩短,但分离度稍下降,降低pH主要引起heme保留时间缩短,而对各珠蛋白肽链影响并不显著,在210-220nm波长范围内,α链和β链峰面积比约等于1,且灵敏度较280nm大大提高,但基线不平；多重比较结果提示,α/preβ+β在正常组与HbH病组、β携带者组、β中重型组均具有显著性差异(P＜0.05),但正常组与α静止性/标准型组则不具有显著性差异(P＞0.05)；ROC曲线分析获得筛查β地中海贫血携带者最优指标为δ/β,其截断值为0.026,特异性敏感性均达100％,提示HBH病的最优指标为α/preβ+β,其截断值为0.626,敏感性为96.6％,特异性为89.6％；另外,7例HBWS和13例HBE均被准确筛查出.结论 本研究建立了一种简便快速高分辨率的珠蛋白肽链反相液相色谱分离技术,可应用于地中海贫血、异常血红蛋白的临床筛查、地中海贫血治疗评价以及其他相关研究,同时本研究所采用方法开发策略对于类似工作具有一定的参考价值.
其他文献
目的 分析HKαα和anti-HKαα两种罕见等位基因的分子结构及其携带者的临床表现,探讨其产生机制和分子诊断的方法,并确定其在广西人群的携带率.方法 收集9个携带有HKαα和2个携带有anti-HKαα的个体,分析血液学表型,使用Gap-PCR、反向点杂交技术和测序技术鉴定α和β珠蛋白基因型.采用二重巢式PCR法和MLPA法分析HKnαα和anti-HKαα的分子结构.采用SnaPshot测序法
Background:Tetralogy of fallot(TOF)is the most commonly observed conotruncal congenital heart defect causing cyanosis.Little is known of the change of specific DNA methylation profile and their associ
遗传性痉挛性截瘫(hereditary spastic paraplegia,简称HSP或SPG)是一组以双下肢进行性肌张力增高和无力、剪刀步态为特征的具有显著遗传和临床异质性的综合征,有常染色体显性、常染色体隐性和X连锁隐性三种遗传方式,目前已定位的HSP位点超过40个,发现的致病基因超过20个。研究表明编码NTE蛋白的基因突变导致一种复杂型HSP-SPG39,但发现的突变均为错义突变。为分析这
目的 分析多个抑癌基因启动子区域CpG岛异常甲基化与非小细胞肺癌关系.方法 收集原发性非小细胞肺癌患者肺癌组织与癌旁正常组织,提取DNA并利用甲基化特异PCR(MSP)方法进行抑癌基因甲基化检测,对资料进行logistic回归分析.结果 对94例肺癌患者资料进行的分析结果表明,91.49％肺癌患者肺癌组织中抑癌基因发生了甲基化,明显高于相应的癌旁正常组织(40.43％)(P＜0.01).其中p 1
目的 对重庆地区一个常染色体显性遗传的遗传性少毛症家系进行基因诊断,并探讨其临床特点。方法 对先证者进行病史和家族史询问以及详细的临床检查。提取所有家系成员的基因组DNA,扩增HR基因及其上游开放阅读框基因的所有编码序列直接进行序列测定,与数据库中的参考序列进行比对分析。结果 包括先证者在内的所有患者自幼头发眉毛稀少,随年龄增长头发生长缓慢、易断,自青春期开始出现头发脱落。查体见弥漫性头发稀疏,发
目的 对一个肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)家系进行基因突变鉴定和产前基因诊断.方法 收集LGMD-2C型患儿1例,采集患儿及其父母和外婆的外周血(5mL/人份),抽取孕11～13周胎儿绒毛组织,常规蛋白酶K-SDS-酚/氯仿法提取基因组DNA.针对SGCG基因的7个外显予、5UTR、3UTR及外显子-内含子交界处设计引物.PCR-测序检
智力低下(Intellectual disability,ID)是一种常见的终身性疾病,在人群中的发病率约为1％～3％,男性患病率高于女性.目前至少一半以上的智力低下发病原因尚不明确,已知病因的智力低下患者中,约一半与遗传因素有关,其中基因突变是导致ID发生的重要因素之一.我们通过G显带和高分辨染色体分析技术在智力低下伴孤独症患者发现一例新发生的46,XY,t(3；18)(p 13；q23)平衡易
目的 分析新疆蒙古族人群的起源,迁移以及不同地区蒙古族人群及其他少数民族的遗传差异和特征,可为中华民族多元化格局的形成提供遗传学方面的佐证,还可为研究人群起源、分化、迁徙、融合等历史问题提供遗传学上的证据.方法 本研究对120份新疆蒙古族无关人群外周血样本,采用ABI3730测序仪对mtDNA高变区序列进行测序,计算单倍型多样性(H),核苷酸多样性(πn)、核苷酸成对差异平均数(π)等多态指标；结
背景与目的 肌萎缩侧索硬化(ALS)因具体发病机制不甚明了,至今尚无有效治疗药物.患者通常在起病后3～10年内因呼吸衰竭而死亡.新近研究认为ATXN2基因的中间片段(CAG重复数在27-33)与ALS发病风险相关,这可能对研究ALS的发病机制有所帮助,类似研究在中国人群中报道甚少.方法 采集290名ALS患者和345名健康对照的外周血,对其进行DNA的抽提；设计ATXN2的引物,PCR扩增上述研究
目的 探讨G蛋白β3亚单位基因G814A(rs5442)、C825T(rs5443)、C1429T(rs5446)3个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)在延边地区人群的分布特征及连锁不平衡关系.方法 应用SNaPshot平台进行定点序列分析(minisequencing)技术对245名中国延边地区人口的GNB3基因3个SNP位点进行基因分型,分别