【摘 要】
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研究目的：弓形虫纳虫泡中的致密颗粒(dense granule)可分泌致密颗粒蛋白(granule antigen,GRA),致密颗粒蛋白在修饰调理纳虫泡过程中起着重要作用,参与体在细胞内存活和复
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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研究目的：弓形虫纳虫泡中的致密颗粒(dense granule)可分泌致密颗粒蛋白(granule antigen,GRA),致密颗粒蛋白在修饰调理纳虫泡过程中起着重要作用,参与体在细胞内存活和复制.GRA1 又称为P24,通过调节钙离子浓度来稳定纳虫泡膜,本试验主要制备弓形虫GRA1 抗体,研究GRA1 在弓形虫虫体内的位置和分布.材料方法：培养、收集、纯化弓形虫速殖子,根据GRA1 基因序列,设计合成GRA1基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增GRA1 基因片段,克隆至原核表达载体pET28a,大肠杆菌表达弓形虫GRA1.应用纯化的该重组蛋白免疫绵羊,制备抗弓形虫GRA1 抗体.采用免疫荧光法研究GRA1 在弓形虫生长过程中的位置和分布.结果：以弓形虫基因组DNA 为模板,PCR 扩增出570 bpGRA1 基因片段,成功构建重组质粒pET-GRA1,所表达的融合蛋白大小约为23 kD.重组蛋白的抗血清能够识别弓形虫的GRA1 天然蛋白.GRA1 位于弓形虫虫体膜和致密颗粒.结论：质粒pET-GRA1 在大肠杆菌中得到了表达,为进一步利用该重组蛋白进行弓形虫病免疫诊断及入侵机制的研究奠定基础.
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