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目的：建立抗人NPY的单克隆抗体细胞株。
方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。
结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1,腹水效价为1∶20万～1∶200万,纯化抗体效价为0.05μg/ml～0.0005μg/ml,4A8抗体纯度达到95%以上,抗体亲和常数分别为5.27★106L/mol、3.39★106L/mol、1.05★107 L/mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。
结论：成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。
方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。
结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1,腹水效价为1∶20万～1∶200万,纯化抗体效价为0.05μg/ml～0.0005μg/ml,4A8抗体纯度达到95%以上,抗体亲和常数分别为5.27★106L/mol、3.39★106L/mol、1.05★107 L/mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。
结论：成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。