【摘 要】
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大豆是重要的粮油作物,是食用植物油与植物蛋白的主要来源。尽管转基因大豆已商业化20余年,但大豆的高效遗传转化一直以来是植物基因工程的难点之一,其中农杆菌菌株和菌液浓
【机 构】
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农作物基因资源与遗传改良国家重大科学工程/农业部北京大豆生物学重点实验室/中国农业科学院作物科学研究所;
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大豆是重要的粮油作物,是食用植物油与植物蛋白的主要来源。尽管转基因大豆已商业化20余年,但大豆的高效遗传转化一直以来是植物基因工程的难点之一,其中农杆菌菌株和菌液浓度是影响转化效率的重要指标,而适宜的筛选标记和高效稳定的筛选体系是促进转化细胞有效再生,提高遗传转化效率的保障。本研究以易转化大豆品种Jack为受体,以GUS基因瞬时表达效率为指标,评价了不同农杆菌菌株和菌液浓度对侵染效率的影响。结果发现农杆菌菌株Agl0较其它三个菌株EHA105、C58C1和LBA4404对子叶节外植体更敏感且OD600介于0.6-0.9时侵染效率较高。利用筛选获得的最佳组合优化前期构建的超声波与表面活性剂辅助农杆菌介导大豆子叶节遗传转化技术体系,以草甘膦抗性基因G2EPSPS、G2MEPSPS和G10EPSPS为筛选标记,以草甘膦为筛选剂,结合组培再生阶段的严格筛选和优化建立的转化体苗期草甘膦定量点施表型鉴定系统,建立了稳定的大豆遗传转化技术体系,再生T0植株95%以上苗期耐1μLRoundup原液点施鉴定且呈分子阳性,平均遗传转化效率介于2.9%至5.6%之间。并创制了一批抗2倍以上生产剂量草甘膦或复合性状兼抗草甘膦转基因大豆新材料,为大豆遗传转化体系的优化提供参考,为具有自主知识产权的国产转基因大豆研发提供了优异抗性资源
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