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目的：使用实验及统计学方法评估DNA类实时荧光PCR试剂盒的检测限(LOD)。
方法：采用EP17-A原则，梯度稀释巨细胞病毒(CMV)核酸及乙型肝炎病毒(HBV)核酸，并用相应实时荧光PCR试剂盒测定各浓度梯度下的病毒核酸检出率，检测结果经概率分析(probitanalysis)确定95％检出率对应的LOD核酸浓度；测定LOD核酸浓度下的平均Ct值及其标准差SD，以评估定量试剂的LOD与定量限(LOQ)的关系，以及定性试剂LOD用于计算参考值(50％检出)cutoff=平均Ct值+1.645 SD。
结果：巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的检测限与定量限一致；乙型肝炎病毒实时荧光PCR核酸检测试剂的检测限为44.0(Ct值)，参考值cutoff为47.5(Ct值)。
结论：核酸梯度稀释检测提供了简便、有效的DNA类实时荧光PCR反应检测限的实验评估方法。