【摘 要】
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设计两对引物M1/M2、N1/N2建立起Nested-PCR,该方法能检测出含0.3LD50狂犬病病毒,比普通PCR的敏感性提高了10000倍,通过27份阳性的病料的序列分析,所检测出的全部都是狂犬病
【机 构】
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广西区兽医防疫检疫站; 广西大学;
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设计两对引物M1/M2、N1/N2建立起Nested-PCR,该方法能检测出含0.3LD50狂犬病病毒,比普通PCR的敏感性提高了10000倍,通过27份阳性的病料的序列分析,所检测出的全部都是狂犬病病毒,具有很强的特异性。遗传进化树表明,广西狂犬病毒株可分成4个群,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群,Ⅳ群与ERA株核苷酸的同源性在99.1-99.6%之间。利用XspI和AccⅢ酶切,Ⅰ群狂犬病野毒株得到70bp、130bp、260bp3个片段,而Ⅱ、Ⅲ群狂犬病野毒株得到130bp、330bp2个片段,Ⅳ群和ERA株出现130bp、200bp2个片段。用SspI酶切,Ⅱ群的毒株切成180bp和280bp两个片段,而其它3个群的毒株没有SspI酶切位点。本研究中的Nested-PCR与RFLP技术,具有快速、敏感、特异的特点,广泛应用于实验室狂犬病的诊断及流行病学调查研究。
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