【摘 要】
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目的建立肠道病毒71型(EV71)抗原的定量ELISA检测方法。可用于EV71疫苗研发及生产过程中的病毒抗原含量检测、EV71的TCID50试验及病毒免疫原性与免疫保护性的关系分析。方法
【机 构】
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北京万泰生物药业股份有限公司; 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心;
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目的建立肠道病毒71型(EV71)抗原的定量ELISA检测方法。可用于EV71疫苗研发及生产过程中的病毒抗原含量检测、EV71的TCID50试验及病毒免疫原性与免疫保护性的关系分析。方法 EV71或其重组抗原免疫小鼠制备的高亲和力抗EV71的中和单抗用作包被抗体和HRP标记抗体,构建定量检测EV71抗原的双抗体夹心ELISA方法 ,该方法经方法验证。以EV71国家抗原标准品为定量依据检测样品中的EV71抗原量,比较本法与显微观察法检测的EV71 TCID50。对EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平进行相关性分析。结果本方法检测抗原的线性范围为0.125-4.0 U/ml、R~2=0.9911、灵敏度达到0.125 U/ml,试剂特异性、准确性、精密度和稳定性良好。本法与显微观察法检测的EV71TCID50的相关性高,r=0.990。21株EV71病毒抗原的特异比活与免疫血清中和抗体间存在强相关性。结论构建了性能良好的EV71抗原的ELISA定量检测方法 ,取代显微观察法准确、客观和特异的分析EV71的TCID50,本方法用于检测EV71抗原的特异比活,有望取代动物效力实验评价疫苗的免疫保护性。
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