【摘 要】
：
采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上.转化DH5a感受态大肠杆菌扩增后提质粒,经BamHI和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析表明筛选到重组质粒pc2X-NS1.SDS-PAGE电泳显示重组质粒转化TB1大肠杆菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;沈阳农业大学,沈阳,110161 中国农业科
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
论文部分内容阅读
采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上.转化DH5a感受态大肠杆菌扩增后提质粒,经BamHI和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析表明筛选到重组质粒pc2X-NS1.SDS-PAGE电泳显示重组质粒转化TB1大肠杆菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子量约为67ku.Western-blot结果表明融合蛋白MBP-NS1蛋白能够与H5N1亚型活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1灭活苗免疫鸭血清发生反应.初步建立了以经过纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的ELISA的检测方法.NS1蛋白在大肠杆菌的成功表达及ELISA检测方法的初步建立为禽流感灭活苗免疫家禽与禽流感病毒感染家禽的鉴别诊断奠定了基础.
其他文献
本文研制开发了抗猪传染性腹泻多联高免蛋黄抽提抗体,经在不同种类的猪场进行现场防治试验观察,该抗体产量大,成本低,易于规模化生产和应用.
本文对黄芪原粉及颗粒剂对仔猪生长性能及免疫力的影响进行了比较,结果表明,它们对仔猪生长性能及免疫力提高有明显作用,且黄芪颗粒剂较黄芪粉剂要好.
本文对猪传染性萎缩性鼻炎病原菌进行分离鉴定,在此基础上,利用自行分离的支气管败血波氏杆菌制备氢氧化铝佐剂灭活苗在现场使用,收到良好的预防效果.
为了探讨AKAV V基因结构及其与功能的关系,本文对AKAV N基因进行克隆和序列分析,为今后应用N基因表达产物建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法和快速检测试剂盒的制备奠定了基础.
本文用所构建的肠出血性大肠杆菌O157:H7stx/ler双基因缺失突变株对小鼠进行免疫,研究其作为疫苗候选株的可行性.
本研究利用已经构建的高度致弱、具有高度鸡胚适应性以及具有广泛抗原针对性的重组禽流感H5N1亚型种毒Re-1株和H9N2亚型种毒Re-2株为种毒,研制出新型禽流感H5、H9二价灭活疫苗.该疫苗免疫鸡无任何不良反应,免疫效果确实.免疫后7天产生可检测的HI抗体;免疫后14天100﹪抵抗H5强毒致死性攻击;免疫后21天-210天产生并保持坚强免疫保护力,H5强毒和H9亚型病毒攻击后免疫鸡不出现临床症状,
将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估.首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIVA/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况
将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究.pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅
本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株.经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗传稳定性,经鸡体内连续传代证实了其毒力稳定性.大量的实验室研究与现地应用结果表明,该疫苗免疫后对鸡十分安全、无任何不良反应;免疫后1周可诱导免疫效力产生,免疫
用RT-PCR方法扩增出禽流感(AIV)A/Muscovyduck/Fujian/2/2000(MF00)株部分HA基因,大小约900bp,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行了序列的分析.通过BamHⅠ和XholⅠ酶切为点将HA基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,成功构建了阳性重组表达质粒,.并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株.经IPTG诱导表达,结果禽流感HA基因在pGEX4