大肠杆菌基受态细胞制备方法的优选

来源 :第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:instant
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以大肠杆菌OH5a、JM109为受体菌,质粒DNA加入感受态细胞,经短暂冰浴和热休克后,直接涂布预热至37℃的平板或加入LB培养基,复活一定时间后涂板。研究不同型号的菌株、不同转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响。结果表明:以0.10mol/L,CaSO4溶液制备感受态细胞,冰浴转化30min,经42℃热休克,作用90s后,不复苏直接用无菌水进行8倍稀释,涂平板筛选转化子,可获得较好的转化效率,每微克(μ g)质粒DNA可以得到高达105个转化菌落。转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响,而转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明显。
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