【摘 要】
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目的：百草枯能够导致肺纤维化发生发展,但其发生机制尚不明确,本文将探讨Wnt/β-catenin 信号通路在百草枯致肺纤维化发生发展中的作用.方法：SD 雄性大鼠48 只,随机数字表法分为对照组和百草枯中毒组,每组24只.百草枯中毒组大鼠腹腔注射百草枯30mg/kg 建立肺纤维化模型,对照组腹腔注射等量等渗盐水.于百草枯中毒后14d和28d断颈处死各组大鼠,剪取肺组织,HE染色和马松染色检测肺纤维
【机 构】
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南京军区总医院(南京大学附属金陵医院)急救医学科
【出 处】
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2017北京协和急诊医学国际高峰论坛
论文部分内容阅读
目的：百草枯能够导致肺纤维化发生发展,但其发生机制尚不明确,本文将探讨Wnt/β-catenin 信号通路在百草枯致肺纤维化发生发展中的作用.方法：SD 雄性大鼠48 只,随机数字表法分为对照组和百草枯中毒组,每组24只.百草枯中毒组大鼠腹腔注射百草枯30mg/kg 建立肺纤维化模型,对照组腹腔注射等量等渗盐水.于百草枯中毒后14d和28d断颈处死各组大鼠,剪取肺组织,HE染色和马松染色检测肺纤维化程度,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin 的表达水平.培养人肺上皮细胞,实验分为3 组,空白对照组：不作任何处理；百草枯组：给予50 μmol/L的百草枯处理3d；抑制剂组：给予50 μmol/L的百草枯处理,同时给予Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-1(Dickkopf related protein 1)20 ng/mL 处理3d.采用免疫荧光和 Western blot 检测 Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin的表达水平,qRT-PCR检测肺上皮细胞标记E-Cadherin、Occludin和成纤维细胞标记蛋白α-SMA、Vimentin 表达水平.结果：大鼠百草枯中毒后,通过HE 染色和马松染色检测发现,肺泡壁增厚,肺泡结构紊乱,胶原蛋白沉积,肺纤维化发生；Western blot检测结果表明,与对照组大鼠相比,百草枯中毒组大鼠肺组织内Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin的表达水平显著升高(P＜0.01).体外实验检测发现百草枯能够激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导肺上皮细胞上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal,EMT)发生,与空白对照组相比,百草枯组肺上皮细胞标记E-Cadherin、Occludin表达水平显著下降(P＜0.01),成纤维细胞标记a-SMA、Vimentin表达水平显著升高(P＜0.01).与百草枯组相比,而抑制剂组β-catenin的表达水平显著下降,抑制了百草枯导致的Wnt/β-catenin信号通路地激活,且E-cadherin 和Occludin 的表达水平显著回调(P＜0.01),而a-SMA 和Vimentin 表达水平显著下调(P＜0.01).结论：百草枯染毒导致大鼠肺纤维化发生,并导致肺组织Wnt/β-catenin信号通路激活,百草枯能够通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导肺上皮细胞发生EMT,而阻断Wnt/β-catenin信号通路能够抑制百草枯诱导的EMT发生,证实Wnt/β-catenin信号通路在百草枯致肺纤维化发生发展中起着重要的调控作用.
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