目的：建立超快速高效液相(UFLC)色谱法测定镇静催眠一类新药B2含量，并进行质量研究。 方法：建立UFLC色谱法测定B2的含量，同时建立常规高效液相法(HPLC)对B2的质量进行方法学比对。在UFLC色谱法中，色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×50mm，1.8μm)，流动相：甲醇-0.3[％]冰醋酸水溶液(35：65)，梯度条件：0min，35：65，20min.55：45，检测波长为272nm，流速：0.4mL·min-1。在常规反相HPLC色谱法中，色谱柱：Alltima C18(4.6×250mm，5μm)，流动相同UFLC色谱法，梯度条件：0min.35：65.20min.55：45.30min.55：45;检测波长：272nm;流速：0.8mL·min-1。 结果：UFLC色谱法中，B2主峰保留时间为5.3min，进样量为2μL。B2在0.031～2μg与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999)，取0.062、0.125、0.250μg·μL-1 3个浓度下测日内精密度分别为0.26[％]、0.25[％]和0.33[％](RSD[％])，日间精密度分别为0.23[％]、0.20[％]和0.13[％](RSD[％])，最低检出限为0.06ng;常规反相HPLC色谱法中，B2主峰保留时间为13min，进样量为10μL。B2在0.01～5.02μg与峰面积呈良好线性关系，取0.005、0.010、0.050μg·μL-1 3个浓度下测日内精密度分别为0.78[％]、0.46[％]和0.49[％](RSD[％])，日间精密度分别为1.04[％]、0.53[％]和0.35[％](RSD[％])，B2的最低检出限为0.1ng。 结论：UFLC法进样量小，灵敏度高，分离效果好，运行时间短，操作简便，能够用于镇静催眠一类新药B2的质量研究和质量控制，为保障B2临床前研制提供有力支持。