目的 原核生物泛素样蛋白(Prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)是在分枝杆菌中发现的类似真核生物泛素分子的蛋白,其可以标记靶蛋白引导其被蛋白酶体降解,本实验通过比较不同的纯化分离方法获得的Pup化靶蛋白的多少,为进一步研究不同条件下Pup化靶蛋白谱(PUPylome)的分析奠定基础。方法 通过基因敲除方法将耻垢分枝杆菌MC2 155基因组上的pup基因敲除,导入已经构建好的可以持续表达带His标签的Pup蛋白的pMV261 (His(6)-Pup)载体,经由Ni+柱纯化带His标签的Pup蛋白结合的靶蛋白,分别按照1)可溶性蛋白纯化方法2)变性蛋白纯化方法3)可溶性方法裂解菌体变性方法亲和层析分离蛋白或4)变性方法裂解菌体可溶性方法亲和层析分离蛋白等四种不同的方式。结果 可溶性蛋白纯化方法、变性蛋白纯化方法、先可溶性再变性的蛋白纯化方法均不能得到令人满意的结果,只有变性方法裂解菌体可溶性方法亲和层析分离蛋白的方法达到了实验的要求,获得了在数量和性质上满足进一步分析的蛋白样品。结论 先变性方法裂解菌体再以可溶性方法亲和层析分离蛋白的方法是可以采用的纯化Pup化靶标蛋白的方法,所获得的蛋白在数量和性质上满足进一步实验分析的指标。