【摘 要】
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目的：建立可用于对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)和牛肠道病毒(Bovine Enterovirus,BEV)的同时检测的方法.方法：根椐GenBank中BVDV、BCoV和BEV基因的保守序列,设计合成引物,优化条件,建立上述病毒的三重RT-PCR方法.应用建立检测方法对临床样本进行
【机 构】
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山东省农业科学院奶牛研究中心,山东 济南 150100
【出 处】
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中国畜牧兽医学会养牛学分会第八届全国会员代表大会暨2015年学术研讨会
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目的：建立可用于对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)和牛肠道病毒(Bovine Enterovirus,BEV)的同时检测的方法.
方法：根椐GenBank中BVDV、BCoV和BEV基因的保守序列,设计合成引物,优化条件,建立上述病毒的三重RT-PCR方法.应用建立检测方法对临床样本进行检测,计算符合率.
结果：引物浓度分别为BVDV0.5uL、BCoV0.25uL、BEV0.25uL,退火温度为52℃时,可同时扩增BVDV的289bp,BCoV的458bp和BEV的732bp的特异性片段,对其他4种病毒均无扩增.该方法最低能检出469pg的BVDV、BCoV和BEV的等量混合质粒模板.对24份临床腹泻病料进行检测,与单项RT-PCR检测的符合率为100％.
结论：本研究建立的三重RT-PCR检测方法,具有准确、快速、特异的特点,可用于临床混合感染的同时检测.
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