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携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定
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本研究以RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒SC-L株的S基因抗原区域(简称S1,1-2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,酶切并回收目的片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体。经免疫荧光法鉴定目的基因可在COS7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,构建了携带S基因的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAXD-S1),对该重组菌株的生长特性、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内表达等进行鉴定。结果表明SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定,在1×109CFU/只口服免疫小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠组织(回肠末端)内正常转录及表达。本研究为后续开展减毒沙门氏菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及应用奠定了基础。
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