定位变形链球菌UA159葡聚糖结合蛋白C的表达

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目的:SortaseA酶识别葡聚糖结合蛋白C(GbpC)C端的LPXTG(L亮氨酸,P脯氨酸,X任何氨基酸,T苏氨酸,C甘氨酸)信号,催化该蛋白连接到变形链球菌的细胞壁。本研究拟探讨C端结构为LPXAG的葡聚糖结合蛋白C是否存在于变形链球菌UA159的细胞壁上。方法:PCR法扩增变形链球菌UA159 GbpC基因片段,推测和分析C端氨基酸序列组成;分别提取上清蛋白、胞内蛋白和胞壁蛋白,Western印迹定位GbpC蛋白在变形链球菌UA159各成分中的表达;免疫金标实验直观的观察 GbpC蛋白在变形链球菌UA159上的表达位置;应激条件下进行多聚糖依赖黏附实验(ddag实验)。结果:变形链球菌UA159 GbpC蛋白C端LPXTG结构变异为LPXAG。免疫印记实验可以在壁蛋白中检测到GbpC蛋白的表达;免疫金标实验发现金颗粒在细菌表面均匀分布;变形链球菌UA159在应激条件下表现为ddag+。结论:C端为LPXAG的GbpC蛋白锚定在细菌的细胞壁上,推断sortase A酶识别了LPXAG结构催化了GbpC蛋白和细胞壁肽聚糖的共价连接。
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