【摘 要】
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自然界很难获得大量的耐高温植酸酶.采取连续延伸PCR方法,按照毕氏酵母的偏爱密码,合成1.3 kb烟熏曲霉耐高温植酸酶基因fphy.合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为74％,但编
【机 构】
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上海市农业科学院生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室,上海,201106
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自然界很难获得大量的耐高温植酸酶.采取连续延伸PCR方法,按照毕氏酵母的偏爱密码,合成1.3 kb烟熏曲霉耐高温植酸酶基因fphy.合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为74％,但编码的氨基酸序列一致.将耐高温植酸酶基因fphy插入毕氏酵母高效表达载体pPIC9中,与分泌信号肽序列融合,通过同源重组将耐高温植酸酶基因整合到酵母染色体中,通过SDS-PAGE检测和表达产物的酶活性筛选,得到重组转化子.证明,植酸酶获得有效分泌和高效表达.经过5 L小罐高密度发酵,蛋白质表达量为5.6 g/L.每毫升发酵液中植酸酶的活力单位达130 000U,表达产物耐高温性很强.90℃处理80 min,仍有40％的活性.
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