【摘 要】
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乳酸菌是公认安全的食品级微生物,胞外多糖是其重要的次生代谢产物,具有增强免疫力,抗癌抗肿瘤等生物活性,并可以增加酸奶等液体的粘度,具有广泛的工业化应用价值.本实验
【机 构】
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天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津 300457
【出 处】
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2015年第十届乳酸菌与健康国际研讨会
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乳酸菌是公认安全的食品级微生物,胞外多糖是其重要的次生代谢产物,具有增强免疫力,抗癌抗肿瘤等生物活性,并可以增加酸奶等液体的粘度,具有广泛的工业化应用价值.本实验室前期分离得到一株高产胞外多糖的马奶酒样乳杆菌ZW3,并对其进行了全基因组测序.该菌染色体上含有一段14.4kb的胞外多糖合成基因簇,WANG_1291 基因位于该基因簇上,生物信息学分析表明,WANG_1291 编码的蛋白属于Lefthandedparallel beta-helix(LbetaH)蛋白超家族,具有LbH_MAT_like 结构域,在乙酰基存在的条件下,可以催化对应的糖类底物O-乙酰化.为进一步研究该基因功能,我们将其克隆至大肠杆菌表达载体pET30a 上,经IPTG 诱导表达,在20KD 处出现了一条新的蛋白条带,与预计分子量大小相符,采用镍亲和柱层析进行纯化,得到高纯度的WANG_1291 蛋白.使用薄层色谱及气质联用仪鉴定目的蛋白的酶学活性,酶学性质研究首次证明目的蛋白能够催化半乳糖和乙酰辅酶A 生成O-乙酰半乳糖,为半乳糖-O-乙酰转移酶,该酶的Km 值为0.6mM、最适温度为37℃、最适pH 为7.4.接着我们又将该基因插入乳酸菌表达载体pMG36e 中并转化乳酸乳球菌WH-C1,利用苯酚-硫酸法测得重组菌的胞外多糖产量是野生菌的2.1 倍,胞外多糖产量有了明显的提高,该基因对胞外多糖的合成有着促进作用.
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