【摘 要】
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目的:获得具有抑制猪流感病毒复制能力的表达多基因转基因猪.
方法:在成功培育F0代表达shRNA-Mx-RNAi三基因转基因猪的基础上,经PCR、Southern blot、RT-PCR、Western bl
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所150001
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目的:获得具有抑制猪流感病毒复制能力的表达多基因转基因猪.
方法:在成功培育F0代表达shRNA-Mx-RNAi三基因转基因猪的基础上,经PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot 方法鉴定,筛选出阳性转基因猪,与野生型同品种猪(WT)进行杂交繁育F1代转基因猪.通过上述分子生物学方法分析阳性转基因猪.分离与培养1日龄F1代转基因猪体细胞,100TCID50A /Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株感染体细胞,通过间接免疫荧光(IFA)、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、病毒滴度测定分析了转基因猪体细胞抗流感病毒活性.
结果:3头F0代转基因猪均为阳性转基因猪,选择其中1头阳性转基因猪与野生型同种猪繁育获得5头F1代转基因猪,1头为阳性转基因猪.与非转基因猪和WT猪相比,阳性转基因猪体细胞具有抑制流感病毒复制活性,细胞感染流感病毒16h,细胞中H1N1 PB2基因复制效率比WT降低2倍,细胞上清中病毒TCID50达1×10-2.8.
结论:该表达shRNA-Mx-RNAi三基因转基因猪体细胞在体外具有抑制流感病毒复制活性,为进一步在体内评价转基因猪抑制猪流感病毒病毒活性奠定了基础.
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