【摘 要】
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将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1.rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Western
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 沈阳农业大
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1.rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Westernblot和ELISA分析表明:获得了分子量26ku的NS1蛋白;并且该蛋白可与H5N1亚型高致病性禽流感感染鸭血清发生特异反应,而不能与H5N1亚型灭活疫苗免疫鸭的血清发生反应.试验结果表明:NS1在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达,具有与病毒蛋白相似的免疫活性,重组NS1蛋白可以作为区分免疫及自然感染动物的鉴别诊断抗原.NS1蛋白的成功表达为禽流感病毒自然感染家禽与禽流感灭活苗免疫家禽的鉴别诊断奠定了基础。
其他文献
使用灭活的SARS病毒免疫SPF鸡,定期收集鸡蛋.用水稀释法提取鸡蛋中的IgY,将其进一步纯化,制备了抗SARS病毒卵黄抗体.经SDS-PAGE、Western-blot及中和试验结果表明纯化后的卵黄抗体具有较高的纯度和反应活性,中和效价可达1:640.冻干及稳定性试验的结果表明,冻干后的卵黄抗体物理性状、反应活性及稳定性良好.
目的获得五指山猪内源性反转录病毒5端非编码区(5UTR)cDNA,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础.
方法采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆来源于五指山猪的内源性反转录病毒(PERV-WZS)5UTR,并通过NCBI公共数据库BLASTN序列进行同源性分析,应用KEGG数据库对该转录调控区进行顺式作用元件定位分析.
结果通过RACE方法获得
应用不同引物将PRRSBJ-4毒株ORF5缺失信号肽的dE基因及其缺失突变体dEM分别克隆至原核高效表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-6P-dE、pGEX-6P-dEM,转化大肠杆菌BL21细胞,经诱导获得重组融合蛋白(GST-dE,GST-dEM),表达量分别为16％,32％.分别经包涵体变性、复性,GST亲和层析、凝胶层析等获得纯化的重组蛋白GST-dEM、GST-dE.应用
以纯化的口蹄疫(FMD)非结构蛋白3ABC作为捕捉抗原,金标口蹄疫抗原作为金标试剂,建立检测口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的胶体金免疫层析试纸条(ICS).同时,应用FMDICS试验和UBIFMD非结构蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对反刍动物、猪标准阳性血清的不同滴度进行检测,结果表明ICS检测反刍动物时的敏感性与ELISA接近,而检测猪时其敏感性低于UBI的ELISA试剂盒.特异性试验证
为了研究鸡包涵体肝炎过程中单核巨噬细胞分子免疫机理.本研究采用200只1日龄SPF雏鸡,2日龄时接种FAV-8型禽腺病毒100只,分别在1,3,5,7,9,12,15,20,25,30日龄时,取攻毒组和对照组各10只,心脏采血致死,制备血液、脾脏白细胞悬浮液,用流式细胞仪检测血液和脾脏中单核巨噬细胞的变化,血液中单核细胞的凋亡规律.结果显示:脾脏Ia+Mφ只在攻毒后第25d有显著提高,第1、5到7
本研究以传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurateRT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA.序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5,,3,端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,,基因组B节段全长共2843
目前对新城疫(Newcastledisease,ND)致病性的检测常用的方法为体外试验,需要测定三个致病指数,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI),6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI).本试验对2株新城疫病毒分别用普通鸡和鸡胚和SPF鸡和鸡胚来测定这三个致病指数,结果显示,在此试验中不能用普通鸡和鸡胚来代替SPF鸡和鸡胚,母源抗体对MDT和ICPI的测定
利用PCR(PolymeraseChainReaction)技术扩增出IBDV的结构蛋白基因VP3,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确.SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白基因VP3,约33ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9％,
针对新城疫病毒(NDV)F基因保守区内的核苷酸序列设计1对引物,用此对引物和标准NDV毒株(含NDV强毒和弱毒)的RNA为模板,建立并优化SYBRGreenⅠ模式荧光RT-PCRNDV检测方法.待测样品扩增产物的Tm值和阳性对照的Tm值相差在2℃范围之内判为阳性.此法比文献报道的普通RT-PCR法更敏感,但是仍低于鸡胚接种分离病毒法。
根据新城疫病毒(NDV)融合蛋白和禽流感病毒(AIV)核蛋白的核酸序列设计两对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT-PCR方法.试验中未能检出弱毒力NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性.经验证,复合引物与单一引物的扩增