奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析

来源 :中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shanghui
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提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT—PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV—MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素抗病毒活性分别约4.26×105U/mL,8.91×104U/mL。结果表明重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛α-干扰素类生物制品研发奠定了基础。
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