【摘 要】
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目的 构建人睾丸特异性新基因hT279(GenBank登录号BC016750)的原核表达载体,纯化融合蛋白并以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗人睾丸特异性hT279蛋白单克隆抗体(mAb),并进
【机 构】
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暨南大学医学院附属清远医院暨清远市人民医院生殖中心,511518清远暨南大学医学院附属清远医院暨清远市人民医院检验科,518035深圳深圳大学第一附属医院暨深圳市第二人民医院,518035深圳
【出 处】
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广东省医学会第四次生殖医学学术会议
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目的 构建人睾丸特异性新基因hT279(GenBank登录号BC016750)的原核表达载体,纯化融合蛋白并以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗人睾丸特异性hT279蛋白单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法 用PCR方法得到睾丸特异性新基因hT279并克隆至pET32a原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21诱导融合蛋白表达；获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE鉴定后,免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗hT279 mAb,并通过间接ELISA、Western blot和免疫组织化学法对mAb进行特性鉴定.结果 实现了hT279的原核表达,获得了1株稳定分泌抗hT279mAb的杂交瘤细胞株4B2,抗体亚型为IgG2b(κ),效价达到1×104.Western blot鉴定表明,该mAb在人正常睾丸蛋白中相对分子质量约为22 kDa处检测到特异条带.免疫组织化学显示hT279蛋白主要在正常人睾丸的精母细胞及圆形精子细胞中表达,而在男性不育患者睾丸组织中表达消失.结论 成功制备出1株抗hT279的mAb 4B2,为进一步研究hT279在人类精子发生中的功能和男性不育症的诊断提供了特异的检测工具.
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