【摘 要】
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目的:研究甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)的作用. 方法:MTT法检测AT
【机 构】
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海南省肿瘤发生和干预重点实验室 海南 海口 571199
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目的:研究甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)的作用.
方法:MTT法检测ATRA对人肝癌Bel7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用;Western Blotting法分析磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和Src表达,构建干扰AFP表达的载体(AFP-siRNA)并转染Bel7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.
结果:MTT分析显示,人肝癌Bel7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;干扰AFP表达后能显著的增加Bel7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel7402细胞表达pAKT和Src的作用.
结论:肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.
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