【摘 要】
：
[目录]重组抗体具有均一性高,可塑性强,还能够实现抗体的体外进化,是免疫检测技术领域未来重要的发展方向之一.本研究的目的是以分泌沙拉沙星特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞为起点,通过基因工程技术构建沙拉沙星单链抗体原核表达载体,并对表达的单链抗体进行纯化以及初步鉴定,为以后研究抗原抗体结合机制,奠定基础,从而更好的服务于兽药残留检测分析.[方法]以分泌沙拉沙星特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞为起点,提取RN
【机 构】
：
中国农业大学动物医学院,北京100193 河北省石家庄藁城市畜牧水产局,河北石家庄052160
【出 处】
：
2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会
论文部分内容阅读
[目录]重组抗体具有均一性高,可塑性强,还能够实现抗体的体外进化,是免疫检测技术领域未来重要的发展方向之一.本研究的目的是以分泌沙拉沙星特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞为起点,通过基因工程技术构建沙拉沙星单链抗体原核表达载体,并对表达的单链抗体进行纯化以及初步鉴定,为以后研究抗原抗体结合机制,奠定基础,从而更好的服务于兽药残留检测分析.[方法]以分泌沙拉沙星特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞为起点,提取RNA,通过RT-PCR反转录成cDNA,根据抗体分型结果,选择合适的引物分别扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),通过重叠延伸PCR,将VH和VL进行连接,并克隆到表达载体pJB33,转化到大肠杆菌RV308中进行目的蛋白的诱导表达并优化诱导条件.通过SDS-PAGE和Western-blot检测目的蛋白并对目的蛋白进行纯化.[结果]经SDS-PAGE和Western-blot分析可知,目的蛋白大小约为32.5KD左右,与预期相符.通过竞争ELISA检测,其能够与沙拉沙星结合,说明构建的单链抗体活性良好.确定最佳诱导条件为0.25mM,16％,200rpm,16h.超声后用Ni柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果表明能得到单一目的条带.用超微量紫外可见分光光度计粗略测量目的蛋白浓度,最高可达1.61 mg/ml.[结论]成功构建了原核表达沙拉沙星单链抗体的载体pJB33-sar,并用含有His标签的Ni柱纯化出目的蛋白,所得到的单链抗体活性良好.
其他文献
China ranks number one among the apple producing countries in the world.However,presence of pesticide in apple surface beyond the edible limit has raised serious health issues as well as has hampered
为了减少农作物非对靶喷施造成药液浪费和环境污染,对具有一定株距非连续种植的农作物采用自动对靶喷雾,将连续性施药转变为间歇性对耙施药,设计了一种基于模拟正弦调制的红外靶标探测系统,并对实际植株进行探测试验。试验结果表明所设计的系统可对农作物靶标进行自动探测,探测距离范围在3.2～4.4m,探测间距平均值为0.22m.
引言随着农村经济的快速发展和三化同步推进,农业对机械化的需求越来越迫切,农民对机械作业的依赖越来越明显,农机化在农业和农村中的地位和作用越来越突出.青岛市在基本实现小麦、玉米生产全程机械化的基础上,提出了要在巩固和提高粮食生产机械化水平的同时,把工作重点全面转向经济作物机械化上来,以花生、马铃薯、甘薯、大姜、大蒜和胡萝卜六大经济作物为重点,集中精力进行突破,2012年青岛市力争主要经济作物综合机械
For the regression model for quantitative analysis based on near infrared spectroscopy,the optimization method of measurement model can improve the predictive accuracy while saving the involved data a
设计了2BD-11型多功能水稻覆土直播机,可一次完成整平、播种、施肥和覆盖等工序。采用外槽轮式排种器和全液压驱动调节播种量的方式实现了水稻直播的均匀排种;采用双向整平螺旋实现播种地块的整备;采用船形托板可抹平地面,实现基肥、开稻种沟槽的全面覆盖。同时使用该机直播水稻通风采光好、病虫害少、抗倒伏能力强及出苗率高。性能试验表明,该机的播种均匀性变异系数24.5％,各行排种量一致性变异系数3.2％,种子
[目的]探讨棉酚对BALB/C小鼠体外T淋巴细胞功能方面的影响,并进行作用机制的研究,为其作为免疫抑制剂的临床应用提供证据。[方法]本研究选用刀豆蛋白(ConA)作为T淋巴细胞的有丝分裂原,采用MTF法检测棉酚低、中,高剂量组对小鼠体外T淋巴细胞的毒性和增殖作用；流式细胞术检测棉酚对刀豆蛋白(Co nA)刺激下的小鼠体外T淋巴细胞表面分子CD4及CD8表达的影响；双抗夹心ELISA方法检测棉酚对T
[目的]研究三氯生单独及其和氟喹诺酮类加替沙星(GAT),莫西沙星(MXF),左氧氟沙星(LVX),司帕沙星(SPX),环丙沙星(CIP),恩诺沙星(ENR),诺氟沙星(NOR)联合抗五株不同支原体的活性.[方法]利用96孔板培养基稀释法,按照动物支原体最小抑菌浓度(MIC)测定的指导办法测定不同药物的体外抗支原体活性.在96孔微量滴定板上用棋盘式微量稀释法测定三氯生和氟喹诺酮类联合对不同菌株的活
[目的]研究甘草查耳酮A对金黄色葡萄球菌生物被膜表达谱的影响。[方法]甘草查耳酮A处理金黄色葡萄球菌生物被膜后,提取RNA,应用寡核苷酸芯片从全基因组水平考察甘草查耳酮A对金黄色葡萄球菌生物被膜表达谱的影响。[结果]用聚类软件T-profiler分析了基因芯片数据,与对照组相比,药物处理组824个基因差异表达(表达倍数≥2倍),其中355个基因上调,469个基因下调。[结论]甘草查耳酮A显著影响了
[目的]大肠杆菌诱导家蝇幼虫SSH文库筛选得到家蝇防御素基因，通过BLASTn软件分析显示，其与家蝇防御素mRNA全序列(AY260152.1)相似性为91％，与家蝇防御素前体mRNA序列(EF175879.1)相似性为93％，进一步对该基因进行cDNA和全长基因的克隆，并在大肠杆菌中表达，为研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定基础.[方法]：利用RACE技术获取家蝇防御素基因的全长序列，设计特异性
[目的]研究脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱发的肉鸡炎症对肝、肾和小肠道组织中多药耐药蛋白基因(Multi-drug Resistant,mdr)编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达水平以及对P-gp底物恩诺沙星药动学的影响.[方法]采用荧光定量PCR方法,β-actin为内参,分别对LPS组、健康对照组鸡的肝、肾、十二指肠、空肠、回肠mdr的mR