论文部分内容阅读
目的百草枯（PQ）是世界上使用最广泛的除草剂之一。长期暴露于PQ会增加患帕金森氏病（PD）的风险。但是,潜在的分子机制尚不清楚。氧化应激是PQ致神经损害的重要机制之一;动力相关蛋白（Drp1）是线粒体分裂的关键调节因子。本研究主要目的是探讨活性氧（ROS）、NR030777、DRP1介导的线粒体分裂与线粒体自噬的关系,以及在PQ致神经细胞退行性损害中的作用及机制。方法应用0,100,200,300μM PQ处理Neuro-2a细胞后,或用线粒体分裂抑制剂mdivi-1,或活性氧去除剂NAC预处理Neuro-2a细胞后,或过表达lncRNA NR030777后,再用200μMPQ处理,收获细胞。qRT-PCR检测NR030777水平;流式细胞仪检测活性氧,线粒体膜电位。WB检测线粒体自噬通路蛋白,线粒体分裂蛋白表达水平;激光共聚焦显微镜、透射电镜等细胞生物学技术检测神经细胞线粒体分裂与线粒体自噬等效应指标的变化。结果（1） 100、200、300μM PQ处理Neuro-2a细胞3、6、12、24小时后,NR030777显著升高,细胞活力显著下降,细胞内线粒体自噬显著升高,自噬通路激活。（2） 100、200、300μM PQ处理N2a细胞3小时后,细胞活性氧（ROS）显著上升,线粒体膜电位（MMP）显著下降。当用NAC预处理Neuro-2a细胞后,PQ引起的NR030777升高受到抑制,线粒体膜电位（MMP）下降被抑制,并且增强的线粒体自噬也出现了回复。（3） 100、200、300μM PQ处理Neuro-2a细胞3小时后,线粒体分裂显著增强,线粒体分裂相关蛋白升高,融合蛋白水平下降。而NAC可抑制PQ引起的Neuro-2a细胞线粒体分裂增强。（3）当用mdivi-1预处理Neuro-2a细胞,使Drp1活性受抑制后,PQ引起的线粒体分裂增强被抑制,并且升高的线粒体自噬水平出现回复。（4）百草枯能引起细胞线粒体分裂与线粒体自噬显著上升,而过表达NR030777引起细胞线粒体分裂与线粒体自噬显著上升。在过表达NR030777的基础上加百草枯处理能引起细胞线粒体分裂与线粒体自噬进一步上升。结论PQ暴露可引起线粒体损伤,损伤的线粒体分裂增强,形成短圆的线粒体有利于被细胞内自噬清除。而在该过程中,ROS可能调控NR030777通过Drp1介导的线粒体分裂发挥重要的作用。